Amidase (AMD)
Enzymes :Les enzymes sont des catalyseurs biologiques macromoléculaires, la plupart étant des protéines.
Amidase :Ces enzymes catalysent l'hydrolyse de divers amides aliphatiques et aromatiques, endogènes ou exogènes, par transfert d'un groupe acyle à l'eau, avec production d'acides libres et d'ammoniac. Les acides hydroxamiques et autres acides organiques sont largement utilisés comme médicaments car ils entrent dans la composition de facteurs de croissance, d'antibiotiques et d'inhibiteurs tumoraux. Les amidases peuvent être classées en acylases de type R et de type S selon la stéréosélectivité du catalyseur.
En plus de catalyser l'hydrolyse des amides, l'amidase peut également catalyser des réactions de transfert d'acyle en présence de co-substrats tels que l'hydroxylamine.
Les amidases, selon leur origine, présentent des spécificités de substrat différentes : certaines hydrolysent uniquement les amides aromatiques, d’autres uniquement les amides aliphatiques, et d’autres encore les α- ou ω-aminoamides. La plupart des amines possèdent une bonne activité catalytique uniquement pour les amides acycliques ou aromatiques simples, tandis que pour les amides aromatiques complexes et hétérocycliques, en particulier ceux portant des substituants en position ortho, l’activité est généralement faible (seules quelques enzymes présentent une meilleure activité catalytique).
Mécanisme catalytique :
| Enzymes | Code produit | Code produit |
| Poudre enzymatique | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | Un lot de 19 amidases, 50 mg chacune (19 unités * 50 mg / unité), ou autre quantité |
| Kit de dépistage (SynKit) | ES-AMD-1900 | Un lot de 19 amidases, 1 mg chacune (19 unités * 1 mg / unité) |
★ Spécificité élevée du substrat.
★ Forte sélectivité chirale.
★ Rendement de conversion élevé.
★ Moins de sous-produits.
★ Conditions de réaction douces.
★ Respectueux de l'environnement.
➢ Le criblage enzymatique doit être effectué pour des substrats spécifiques en raison de la spécificité du substrat, et obtenir une enzyme qui catalyse le substrat cible avec le meilleur effet catalytique.
➢ Ne jamais exposer à des conditions extrêmes telles que : température élevée, pH élevé/faible et solvants organiques à forte concentration.
Normalement, le système réactionnel doit comprendre un substrat et une solution tampon (au pH optimal de la réaction enzymatique). Des co-substrats tels que l'hydroxylamine doivent être présents dans le système de réaction de transfert d'acyle.
➢ L'AMD doit être ajouté en dernier dans le système de réaction, avec un pH et une température de réaction optimaux.
➢ Chaque type de drainage minier acide (DMA) présente des conditions de réaction optimales différentes ; il convient donc d’étudier chacun d’eux individuellement.
Exemple 1(1):
Activité d'hydrolyse sur différents substrats amides
| Substrat | Activité spécifique μmols min-1mg-1 | Substrat | Activité spécifique μmols min-1mg-1 |
| Acétamide | 3.8 | ο-OH benzamide | 1.4 |
| propionamide | 3.9 | p-OH benzamide | 1.2 |
| Lactamide | 12.8 | ο-NH2benzamide | 1.0 |
| Butyramide | 11.9 | p-NH2benzamide | 0,8 |
| Isobutyramide | 26.2 | ο-Toluamide | 0,3 |
| pentanamide | 22.0 | p-Toluamide | 8.1 |
| Hexanamide | 6.4 | Nicotinamide | 1.7 |
| Cyclohexanamide | 19,5 | isonicotinamide | 1.8 |
| Acrylamide | 10.2 | picolinamide | 2.1 |
| Métacrylamide | 3.5 | 3-phénylpropionamide | 7.6 |
| Prolinamide | 3.4 | Indol-3-acétamide | 1.9 |
| Benzamide | 6.8 |
La réaction a été réalisée dans une solution tampon de phosphate de sodium 50 mM, pH 7,5, à 70 °C.
| Amides | Hydroxylamine | Hydrazine |
| Acétamide | 8.4 | 1.4 |
| propionamide | 18.4 | 3.0 |
| Isobutyramide | 25.0 | 22.7 |
| Benzamide | 9.2 | 6.1 |
La réaction a été réalisée dans une solution tampon de phosphate de sodium 50 mM, pH 7,5, à 70 °C.
Concentration des réactifs associés : amides, 100 mM (benzamide, 10 mM) ; hydroxylamine et hydrazine, 400 mM ; enzyme 0,9 μM.
Exemple 2(2):
Exemple 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al. Extrémophiles, 2001, 5 : 183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al. Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al. Bioorganic Chemistry, 2017, Disponible en ligne 7.
